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Virus transmitidos por alimentos: primer reporte en ostras (Crassostrea gigas) de la provincia de Buenos Aires

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Virus transmitidos por alimentos: primer reporte en ostras (Crassostrea gigas) de la provincia de Buenos Aires

Los norovirus (NoV), junto con los rotavirus (RV) humanos, son los principales agentes virales causantes de brotes de gastroenteritis en todo el mundo.

Mozgovoj, Marina1; Barbieri, Elena2;
Gonzalez, Cintia3; Victoria Montero, Matías4; López Tort, Fernando4; Cap, Mariana3;
Barón, Pedro2; Parreño, Viviana5
1Instituto de Tecnología de Alimentos – Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) –
CONICET. Argentina.
2Laboratorio de Oceanografía Biológica Lobio Cesimar – CCT CONICET-CENPAT. Argentina.
3Instituto de Tecnología de Alimentos – Centro de Investigación de Agroindustria – INTA. Argentina.
4Laboratorio de Biología Molecular – Departamento de Ciencias Biológicas – CENUR Litoral Norte.
5Instituto de Virología e IncuINTA – Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) – CONICET
mozgovoj.marina@inta.gob.ar

Los moluscos bivalvos, debido a su capacidad de concentrar partículas virales en su sistema digestivo por filtración de grandes volúmenes de agua, pueden estar contaminados con estos patógenos. En la costa de nuestro país pueden distinguirse mejillones (Mitylus edulis), vieiras (Aequipecten tehuelchus) y ostras (Crassostrea gigas), como los más relevantes para la actividad pesquera regional y, potencialmente, para la comercialización internacional. Como consecuencia de brotes causados por el consumo de alimentos contaminados con virus, el mercado internacional ha incrementado las exigencias sanitarias sobre la calidad de los productos que se exportan. En este contexto, el objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de virus en ostras (Crassostrea gigas) del sur de la provincia de Buenos Aires. Para ello, se obtuvieron ostras (n=88) a partir de un relevamiento realizado en el año 2015 de la zona sur de la costa bonaerense. Se recolectaron ejemplares de las zonas noreste y sureste de Isla Gama, ubicada frente a la localidad de Bahía San Blas, por fuera de las zonas de restricción de SENASA. El procesamiento de las muestras se realizó según norma ISO/TS 15216-2:2013, con algunas modificaciones. La muestra se definió como un pool de ostras de 2g. La detección de los genomas virales se realizó mediante la técnica de RT-PCR en tiempo real. Se evidenció la presencia de genoma de NoV perteneciente al genogrupo II (GII) y RVA, en dos pooles. La caracterización de la cepa de NoV se realizó mediante RT-nested PCR, la cual permitió amplificar un fragmento comprendido entre ORF1 y ORF2 de 390pb. Estudios filogenéticos demostraron que el genotipo encontrado correspondía a la variante de NoV GII.4, Sidney 2012. Con respecto al RVA, se realizaron cuatro pasajes ciegos en células MA104. Mediante RT-PCR en tiempo real, se mostró una disminución en el valor del CT (ciclo umbral) correspondiente al cuarto pasaje de RVA (CT=25), respecto del valor del CT correspondiente al genoma del virus encontrado inicialmente en el pool de ostras (CT=36). La presencia de partículas virales infecciosas se evidenció mediante inmunofluorescencia directa, usando un nanoanticuerpo VHH específico contra la proteína VP6 de RVA marcado con ALEXA-fluor 488. Este ensayo demostró la viabilidad del RVA encontrado.

En nuestro conocimiento, este trabajo constituye el primer reporte de detección de NoV y RVA en Crassostrea gigas de nuestro país, y representa la primera detección de virus en alimentos en la Argentina. Ante un fortalecimiento en los últimos años de la actividad pesquera de moluscos bivalvos en nuestro país, los estudios realizados representan información epidemiológica de relevancia para la implementación de estrategias de control sanitario que permitan la certificación de inocuidad para la exportación segura de estos frutos de mar de alto valor económico.

Introducción
Las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) representan uno de los principales problemas en salud pública a nivel mundial. Éstas pueden ser causadas por bacterias, virus y contaminantes químicos. Con respecto a los virus, sólo se requiere una mínima cantidad de partículas virales para generar enfermedad. Son muy estables y resistentes en el medio ambiente1. Entre ellos, norovirus genogrupo I y II (NoV GI y GII) y rotavirus (RVA) causan gastroenteritis agudas, generando una elevada morbi-mortalidad en los países en desarrollo. En la Argentina, alrededor de 1.200.000 de casos de diarrea aguda se reportan anualmente y la mitad de estos ocurre en niños menores de cinco años. NoV afecta a humanos de todas las edades. La infección suele ser autolimitada, sin embargo, en algunos casos puede ser más severa e incluso comprometer la vida del paciente2. Para el caso particular de NoV, se ha demostrado que tiene la capacidad de unirse a receptores específicos del tejido de los bivalvos, lo que explicaría por qué estos virus resisten los procesos depurativos, representando un riesgo para el consumo de ostras crudas o cocidas ligeramente3. RVA es la principal causa de diarrea en niños menores de dos años, causando la muerte en los casos más graves4. Se han descripto brotes asociados al consumo de alimentos contaminados con RVA, si bien, son poco frecuentes. Durante estos últimos años se han estudiado las características zoonóticas de algunas cepas de RVA5. Los moluscos bivalvos (ostras, mejillones, almejas) son alimentos especialmente peligrosos porque concentran activamente los virus al filtrar grandes volúmenes de agua y porque, con frecuencia, se consumen crudos o escasamente cocidos6. La gastroenteritis asociada al consumo de moluscos bivalvos ha sido ampliamente documentada7. En la Argentina, los moluscos costeros incluyen a varias especies en las costas de la Patagonia que están sujetas a explotación comercial y actividades acuiculturales o utilizadas para consumo familiar. Los bancos de ostras se han desarrollado luego de la introducción de especímenes para su producción en el año 1982. Desde entonces, la especie ha expandido su distribución desde el estuario de Bahía Blanca hasta la provincia de Río Negro. Las autoridades locales están promoviendo activamente el desarrollo de esta industria, la cual ha crecido enormemente durante los últimos años8. Toda la zona se caracteriza por su cercanía a ciudades importantes y balnearios con afluencia turística, siendo susceptibles de concentrar contaminantes de efluentes cloacales. Estudios previos demuestran que la ostra Crassostrea gigas es capaz de bioacumular una variedad de virus, incluyendo patógenos del grupo Calicivirus9. Los virus entéricos pueden persistir en los sedimentos marinos y mariscos durante varias semanas o meses, no pudiéndose lograr la inactivación viral completa luego de los procesos normales de depuración10-11. En nuestro país la importancia real de los virus en los casos de ETAs está subestimada. En este contexto, en este trabajo se propone estudiar la presencia de NoV y RVA en ostras (Crassostrea gigas) del sur de la provincia de Buenos Aires.

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